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大鼠白介素27(IL-27)ELISA檢測試劑盒技術說明書
BS-2900大鼠白介素27(IL-27)ELISA試劑盒
一、產品概述
本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附技術,專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞培養上清中的白介素27(IL-27)。IL-27是由EBI3和p28亞基組成的異源二聚體,在免疫調節中發揮重要作用?。
二、檢測原理
固相包被?:抗大鼠IL-27單抗預包被于微孔板。
復合物形成?:樣本中IL-27與包被抗體結合,加入生物素標記的檢測抗體形成夾心結構。
酶聯反應?:加入HRP標記的鏈霉親和素,與生物素結合。
顯色測定?:加入TMB底物顯色,終止液終止反應后,在450nm波長下測定OD值,濃度與OD值呈正相關?。
三、試劑盒組分
組分 規格 儲存條件
預包被微孔板 96孔/48孔 2-8℃
標準品(凍干粉) 6個濃度梯度 -20℃
生物素標記抗體 100×濃縮液 -20℃
HRP標記鏈霉親和素 100×濃縮液 -20℃
TMB顯色液 避光保存 2-8℃
終止液(2M硫酸) 室溫 避光
濃縮洗滌液(20×) 需稀釋 室溫
樣本稀釋液 即用型 2-8℃
四、樣本要求
樣本類型?:
血清/血漿:EDTA抗凝,離心后取上清。
組織勻漿:生理鹽水勻漿,離心取上清。
細胞上清:離心去除細胞碎片。
保存條件?:
短期(≤7天):2-8℃。
長期(>7天):-20℃或-70℃,避免反復凍融?。
五、實驗步驟
1. 標準品配制
用樣本稀釋液復溶凍干標準品,稀釋至6個濃度梯度(如1000、500、250、125、62.5、0 pg/mL)。
2. 加樣與孵育
每孔加入100μL標準品或樣本,37℃孵育90分鐘。
洗滌5次,每次300μL洗滌液,拍干。
3. 抗體反應
加入100μL生物素標記抗體,37℃孵育60分鐘。
洗滌后加入100μL HRP標記物,37℃孵育30分鐘。
4. 顯色與終止
加入90μL TMB底物,避光孵育15-20分鐘。
加入50μL終止液終止反應?。
5. 檢測
酶標儀450nm波長測定OD值。
六、結果計算
以標準品濃度為橫坐標(X),OD值為縱坐標(Y),繪制標準曲線。
樣本濃度根據OD值從標準曲線中讀取,若超出范圍需稀釋后復測?。
七、技術參數
參數 指標
檢測范圍 15.6-1000 pg/mL
靈敏度 ≤5.7 pg/mL
精密度(批內/批間) CV <10%/CV <12%
回收率 血清91%、EDTA血漿93%、肝素血漿94%
八、注意事項
試劑保存?:
未開封試劑盒:-20℃保存1年。
開封后:4℃保存1周,長期需分裝-20℃。
操作規范?:
避免溶血、脂血樣本。
洗滌需凈,拍干后立即下一步。
終止液為酸性,需防護皮膚和眼睛?。
質量控制?:
每批實驗設空白孔和標準曲線,R2需>0.95。
樣本稀釋后需重新檢測。
九、常見問題
OD值過高?:樣本濃度過高,需稀釋。
顯色不均?:檢查洗滌或加樣準確性。
線性差?:重新配制標準品或更換試劑?。
十、適用范圍
本試劑盒僅供科研使用,不可用于臨床診斷?。
注:以上僅供參考,不作為實際數據,實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。 Elisa試劑盒
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